27656 - پروژه آزمایشگاهی میکروبیولوژی..

شرح پروژه

- رشته ام میکروبیولوژی

- انجام کارهای آزمایشگاهی پایان نامه ارشد (فقط کارهای ازمایشگاهی)

- عصاره گیری، سنتز نانولیپوزوم، مشخصه یابی نانولیپوزوم های سنتز شده،بررسی شکل و ساختار نانولیپوزوم ها با میکروسکوپSEM، اندازه گیری پتانسیل زتا با دستگاه زتاسایزر، بررسی سایز نانولیپوزوم ها با dls, کشت باکتری و بررسی انها به روش mic , mbc

- درضمن ما ۳ نفر هستیم و کارمون وجه اشتراک داره

- ۲ نفرمون گیاه مشابه داریم و ۲ نفر باکتری مشابه

- عصاره گيری: گیاه  از مرکز ملی ذخایر ژنتیکی و زیستی ایران تهیه می شود. به منظور استخراج عصاره آبی، گیاه به صورت خشک شده و پودر شده تهیه خواهد شد. براي اینكار گیاه پودر شده با آب مقطر )نسبت 1 به 10 )در دماي 80 درجه سانتی گراد مخلوط می شود و روي بن ماري با دمای80 درجه سانتی گراد به مدت 10 دقیقه قرار می گیرد . بعد از طی کردن این مراحل عصاره بدست آمده در دماي محیط خنك و صاف می شود . عصاره آبي تهیه شده بالافاصله در آزمایش ها استفاده می شود و در اگر توقفي در كار صورت گیرد تا زمان استفاده در یخچال با دماي 4 درجه سانتی گراد نگهداري خواهد شد )14 سنتز نانولیپوزوم: لیپوزوم های حاوی عصاره گیاه به روش آب پوشانی لایه نازک و با ترکیبی شامل Phosphatidylcholine (SPC) ، کلسترول ، پلی اتیلن گلیکول و عصاره گیاه  تهیه می گردد، که خلاصه آن به شرح زیر است: ابتدا SPC، کلسترول و عصاره  در حلال کلروفرم و در دمای 45 درجه سانتی گراد بر روی روتاری حل می شود و تحت شرایط خلأ ، فیلم نازک خشک تهیه می گردد. بعد از آن عمل هیدراته کردن با افزودن بافرPBS  طی مدت یک ساعت و در دمای 50 درجه سانتی گراد انجام می گردد. سپس نانوذرات تهیه شده با استفاده از سونیکیت حمامی برای مدت 60 دقیقه کاهش سایز داده می شود (10). مشخصه یابی نانو لیپوزوم های سنتز شده: ویژگی های فیزیکوشیمیایی نانولیپوزوم های سنتز شده شامل: اندازه و پتانسیل زتا، مقدار عصاره بارگذاری شده، مورفولوژی مورد تفحص قرار می گیرد (7) بررسی شکل و ساختار: یک قطره از نمونه مورد نظر که حاوی نانولیپوزوم دارای عصاره است را روی لام خواهیم ریخت و پس از خشک شدن آن را زیر میکروسکوپ الکترونی روبشی (SEM) جهت تایید نتایج حاصل از DLS  بررسی خواهیم کرد (15). تعیین پتانسیل زتا: پتانسيل زتا شاخصي براي ميزان برهم كنش دافعه بين ذرات كلوئيدي است و براي ارزيابي پايداري سوسپانسيون هاو محلول های وزيكولي استفاده مي شود (16). میزان بار سطحی و پتانسیل زتای نانولیپوزوم های حامل عصاره گیاه  با کمک دستگاه زتا سایزر در دمای 25 درجه سانتی گراد اندازه گیری خواهیم کرد (10). بررسی سایز: برای تعیین توزیع ذرات موجود در محلول ها و سوسپانسیون از روش فیزیکی پراکندگی نور دینامیکی برای تعیین توزیع ذرات موجود در محلول ها و سوسپانسیون استفاده می شود. برای تعیین اندازه ذرات در محدوده چند نانومتر تا میکرون می توان از این روش استفاده کرد که روشی غیر مخرب و سریع می باشد. اخیرا نشان داده شده است که، ذراتی قطرآن ها از نانومتر نیز کم تر است می توان با این روش آن ها را اندازه گیری نمود. این روش وابسته  به برهم کنش نور با ذره می باشد. نور پراکنده شده توسط نانو ذرات موجود در سوسپانسیون با زمان تغییر می کند که می تواند به قطر ذره ارتباط داده شود (17). بررسی خاصیت آنتی باکتریال نانولیپوزوم های حاوی عصاره گیاه  با روش MIC   وMBC  : تعیین حداقل غلظت مهارکنندگی (MIC) عصاره گیاه  به روش میکرودایلوشن براث و حداقل غلظت کشندگی (MBC) عصاره گیاه  نیز به وسیله ی تست سریال رقت MIC  و از طریق کشت دادن روی پلیت آگار انجام می گردد (18). براي تعيين اين غلظت از روش رقت سازي در پليت 96 خانه استفاده خواهد شد. بدين منظورمحلول استوك اوليه از ماده ي مورد بررسي مان را با استفاده از محيط كشت نوترينت براث تهيه خواهد شد. سري رقتي از نمونه هاي نانوليپوزوم و عصاره در نوترينت براث تهیه خواهیم کرد. سوسپانسیونی از کشت تازه باکتری دهانی در سرم فيزيولوژي تهيه و كدورت آن ها با لوله ي نيم مك فارلند تنظيم خواهیم کرد. اين سوسپانسيون با نوترينت براث رقيق خواهند شد و پس از آن به هر چاهك اضافه خواهیم کرد. پس از گرمخانه گذاري، چاهك ها را از لحاظ داشتن كدورت بررسي خواهیم کرد و اولين چاهكی که كدورتی در آن نباشد به عنوان كمترين غلظت مهار كنندهي رشد، نامیده خواهد شد. سپس از هر يك غلظت هاي پايين تر ازMIC  بر خواهیم داشت و و در پليت هاي دارای محيط كشت، كشت سطحي انجام می دهیم و به مدت 24 ساعت در انكوباتور در دماي 37درجه سانتی گراد قرار داده خواهد شد. سپس رشد و عدم رشد باكتري ها بررسي شد، اولين غلظتي كه در آن عدم رشد مشاهده گرديد به عنوان  MBC در نظر خواهیم گرفت (12).

مهارت ها و تخصص های مورد نیاز

درباره کارفرما

مهندس خوب

عضویت شش سال پیش

9455 پروژه ثبت شده ،

27 پروژه در حال انجام ،

193 پروژه آماده دریافت پیشنهاد ،

نرخ پذیرش پیشنهاد 34%